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    豬流行性腹瀉病毒+豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR檢測試劑盒說明書(20次)

         更新時間:2019-06-04       瀏覽量:
    【注意】接到貨后請認真閱讀注意事項。
    【用途】用于豬流行性腹瀉病毒病的檢測、診斷和流行病學調查。
    試劑
    【操作步驟】
    1.RNA提取 
    (1) 取疑似病料(空腸、小腸及其內容物等),用Hank’s液或PBS研磨成1:3懸液,在-20 ℃反復凍融3次,經3 000 r/min離心5 分鐘,上清液再經12 000 r/min離心15分鐘,上清液-70 ℃保存備用。
    (2)取200uL上清液(或標準品T),移入新的1.5mL滅菌EP管中,加入200uLSR-I,漩渦振蕩混合均勻,靜置5min。
    (3)加75uL TU-1,漩渦振蕩混合均勻,10000r/min離心5 min。
    (4)將上清轉移到新的2 ml離心管(試劑盒內提供)中,加入300 uL 異丙醇(1%冰乙酸),上下倒置6-8次,混合均勻。
    (5)將步驟4中的混合液移入制備管中,并將制備管置于同一2 ml離心管,10000 r/min離心1min。
    (6)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加500 uL SR-II,室溫靜置1min,10000 r/min離心1 min。
    (7)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加700 uL SR-,10000 r/min離心1 min。
    (8)將制備管置回到2 ml離心管中,10000 r/min離心1 min。
    (9) 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中(試劑盒內提供),在制備管膜中央加40 uL TU-2, 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板,即用或-70℃凍存備用。
    2.One-Step RT- PCR加樣體系
     
    3.反應程序
    4.電泳
    配制1%瓊脂糖凝膠,取PCR產物5uL混合1uL TU-8,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加3uLTU-7,在120v 電壓下,1×TAE液中電泳15分鐘,在紫外成像儀下觀察結果。
    【結果判定】
    在約720bp位置出現擴增帶,豬傳染性胃腸炎檢測結果為陽性,在約240bp位置出現擴增帶,豬流行性腹瀉檢測結果為陽性(如圖)。                                                              
      1.DL2000 Marker     
      2.標準陽性片段
    【聯系人】   王金良、管宇            電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用



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    編輯:熊方方




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