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    豬放線桿菌胸膜肺炎和副豬嗜血桿菌多重PCR檢測試劑盒說明書(20次)

         更新時間:2019-06-05       瀏覽量:
    【注意】  用前請認真閱讀注意事項。
    【用途】  用于豬放線桿菌胸膜肺炎和副豬嗜血桿菌病的檢測、診斷和流行病學調查。
    【試劑】
    【操作步驟】
    1. 病料處理
       取適量病料關節液、心包積液、肺臟等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS液按照1:3稀釋成均勻乳劑,-20℃反復凍融3次以上。
    2 . DNA的抽提
    (1) 取已凍融好的病料8000r/min離心5min,取上清500μl(或質控樣品T,500μl),加50μl SR-I和6μl SR-II,50℃水浴1-2h,并不時顛倒混勻一下。
    (2) 加入等量酚:氯仿(1:1),漩渦振蕩20s,4℃、12000r/min,離心5min。
    (3) 取上清,加入等量氯仿,振蕩混勻,4℃、12000r/min,離心5min。
    (5) 取400μl上清,加入800μl 無水乙醇,再加40μl SR-III,混勻。-20℃放置30~60min,4℃,12000r/min,離心10min,小心棄上清,沉淀即為DNA。用75%乙醇(滅菌雙蒸水配,每次加入500μl)沖洗2次,小心吸去75%乙醇,勿使DNA丟失,室溫晾干或超凈工作臺風干15-25min,加入20μl TU-5溶解即為模板,即用或-20℃保存備用。
    3.PCR操作
    加樣體系:(將下列試劑加入0.5mlPCR反應管中,最好在冰浴條件下加樣。)
    反應條件:
    4.電泳
       稱量0.25g瓊脂糖,放入錐形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×濃縮液,儲存備用),于微波爐中熔解,加入1.5μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽,加入梳子,倒入瓊脂凝膠,待凝固后,將PCR產物6μl混合1.5μl TU-7,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加入3μlTU-8,在100v 電壓下,1×TAE液中電泳30分鐘,在紫外成像儀下觀察結果。
    【結果判定】
    在342bp(豬放線桿菌胸膜肺炎)及841bp(副豬嗜血桿菌)位置出現擴增帶,實驗結果為陽性(如圖)。                            
    1.DL2000 Marker(TU-9)      
    2.標準陽性片段

    [注意事項]
    1. 每次使用,開蓋之前請先瞬時離心,使試劑沉于管底。
    2. 本試劑盒為20頭份量試劑,操作失誤或移液器不準確造成最終劑量不夠情況,不予負責。
    3. 所有試劑在要求溫度下保存,-20℃保存試劑盡量減少反復凍融,使用后的試劑立即放回,避免在室溫擱置太久。
    4. 盡量建立PCR試驗操作區,避免交叉污染。
    5. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行,由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況,不予負責。
    6. 吸頭、離心管和PCR管在使用前,要高壓滅菌,操作過程盡量不要用手接觸到管內壁,可用鑷子夾取。
    7. 注意防止試劑污染,在有效期限前用完。
    8. TU-9所裝試劑為致癌物質,避免接觸到皮膚。如若不甚接觸,請立即用洗滌劑清洗。
    [有效期]
    本制品有效期為1年,生產日期見包裝內側。
    [聯系人]   管宇、王金良              電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用



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    編輯:熊方方




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