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    豬增生性腸炎PCR檢測試劑盒說明書(10次)

         更新時間:2019-06-06       瀏覽量:
    【注意】  用前請認真閱讀注意事項。
    【用途】  用于豬增生性腸炎的檢測、診斷和流行病學調查。
    【試劑】
    【操作步驟】
    1. 病料處理
    組織樣品:取適量小腸、回腸,剝離腸粘膜后,于滅菌研缽充分研磨,用PBS以1:3稀釋成均勻乳劑,-20℃反復凍融3次以上,8000 r/min離心5min,取上清。
    2. DNA的抽提
    2.1組織樣品:將組織樣品的上清液(或T,T為質控樣品)200μl,加50μl SR-I和800μl SR-II,混勻,室溫靜置10min;渦旋,14000g g/min×1min,棄上清液;加入1 mL 70%乙醇,離心14000g /min×1min,棄上清,本操作重復1次;沉淀中再加入丙酮1mL,離心,14000g/min×1min;沉淀置于56℃干燥15min,加入TU-1 50μl, 離心12000g /min×2min,上清液放入-20℃保存,即為模板。
    2.2 糞便樣品:稱取0.2g糞便,懸浮于900μl SR- II中,渦旋并離心,14000g離心1min,室溫靜置1h;吸取上清夜置于含有50μl SR-I的離心管中,室溫靜置10min,渦旋并離心,14000g /min×1 min;加入1 mL 70%乙醇,離心14000g /min×1min,棄上清,本操作重復1次;沉淀中再加入丙酮1mL,離心,14000g/min×1min;沉淀置于56℃干燥15min,加入TU-1 50μl,離心,12000g/min×2min,上清液放入-20℃保存,即為模板。
    3.PCR操作
    加樣體系:
     
    反應條件:
    4.電 泳
        稱量0.25g瓊脂糖,放入錐形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×濃縮液,儲存備用),于微波爐中熔解,加入1μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽,加入梳子,倒入瓊脂凝膠,待凝固后,將PCR產物6μl混合1.5μl TU-10,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加入3μl TU-11,在100V 電壓下,1×TAE液中電泳20min,在紫外成像儀下觀察結果。
    【結果判定】 
    在295bp 位置出現擴增帶,實驗結果為陽性(如圖)。
    【注意事項】
    1. 每次使用,開蓋之前請先瞬時離心,使試劑沉于管底。
    2. 所有試劑在要求溫度下保存,盡量減少反復凍融,使用后的試劑應立即放回。
    3. 本試劑盒為10頭份量試劑,加樣和反應程序嚴格按照說明書進行,由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況,不予負責。
    4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前,應高壓滅菌。
    5. 注意防止試劑污染,在有效期限內用完。
    6. TU-9所裝試劑為致癌物質,避免接觸到皮膚。如若不甚接觸,請立即用洗滌劑清洗。
    [有效期] 本制品有效期為1年,生產日期見包裝側面。

    [聯系人] 王金良、管宇               電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用



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    編輯:熊方方




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