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    鴨黃病毒一步法RT-PCR檢測試劑盒說明書(20次)

         更新時間:2019-06-10       瀏覽量:
    【注意】 用前請認真閱讀注意事項。
    【用途】 用于禽流感病毒病的檢測、診斷和流行病學調查。
    試劑
    【操作步驟】
    1.RNA提取 
    (1) 取疑似鴨黃病毒病的病料(取肺、脾、腦、輸卵管等組織等)1~4g于無菌研缽,研磨并用PBS液(pH7.2~7.4)稀釋成1:4乳劑,分裝1.5ml滅菌EP管,反復凍融2~3次,8000r/min離心5分鐘。(病毒培養液,只需凍融1次即可8000r/min離心5分鐘)
    (2)取200uL上清液(或標準品T),移入新的1.5mL滅菌EP管中,加入200uLSR-I,漩渦振蕩混合均勻,靜置5min。
    (3)加75uL TU-1,漩渦振蕩混合均勻,10000r/min離心5 min。
    (4)將上清轉移到新的2 ml離心管(試劑盒內提供)中,加入300 uL 異丙醇(1%冰乙酸),上下倒置6-8次,混合均勻。
    (5)將步驟4中的混合液移入制備管中,并將制備管置于同一2 ml離心管,10000 r/min離心1min。
    (6)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加500 uL SR-II,室溫靜置1min,10000 r/min離心1 min。
    (7)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加700 uL SR-,10000 r/min離心1 min。
    (8)將制備管置回到2 ml離心管中,10000 r/min離心1 min。
    (9) 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中(試劑盒內提供),在制備管膜中央加40 uL TU-2, 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板,即用或-70℃凍存備用。
    2.One-Step RT- PCR加樣體系
    3.反應程序
    4.電泳
    配制1%瓊脂糖凝膠,取PCR產物5uL混合1uL TU-8,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加3uLTU-7,在120v 電壓下,1×TAE液中電泳15分鐘,在紫外成像儀下觀察結果。
    結果判定
    在約400bp位置出現擴增帶,實驗結果為陽性(如圖)。
                                     
    1.DL2000 Marker     
    2.標準陽性片段
    注意事項
    1.每次使用,開蓋之前請先瞬時離心,使試劑沉于管底。
    2.本試劑盒為20頭份量診斷試劑,操作失誤或移液器不準確造成最終劑量不夠情況,不予負責。
    3.盡量建立PCR試驗操作區,避免交叉污染,RNA抽提嚴格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并經常更換。
    4.槍頭、離心管和PCR管在使用前,最好用DEPC水(0.1%)處理,然后高壓滅菌后烘干,操作過程盡量不要用手接觸,可用鑷子夾取。
    【有效期】                                             
    本制品有效期為1年,生產日期見包裝側面。
    【聯系人】   王金良、管宇            電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用



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    編輯:熊方方




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