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    犬細小病毒病PCR檢測試劑盒說明書(20次)

         更新時間:2019-06-10       瀏覽量:
    【注意】  用前請認真閱讀注意事項。
    【用途】  用于犬細小病毒的檢測、診斷和流行病學調查。
    試劑
    【操作步驟】
    1. 病料處理
       
    取適量病料(小腸、心、淋巴結)等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS液按照1:3稀釋成均勻乳劑,-20℃反復凍融3次以上。
    2. DNA的提取
    (1) 取已凍融好的病料,1000rpm離心5min,取上清200μl(或質控樣品T,200μl),加25μl TU-1和3μl TU-2,50℃水浴1~2h,期間輕柔振蕩幾次幫助裂解。
    (2)加入200μl SR-I,劇烈顛倒輕搖充分混勻,70℃放置10min。
    (3)冷卻后加入100μl異丙醇,充分混勻后,加入一個吸附柱(試劑盒內提供)中(吸附柱放入收集管中)10000rpm離心30秒,棄掉收集管中的廢液。
    (4)加入500μl SR-Ⅱ,10000rpm離心30秒,棄廢液。
    (5)加入700μl SR-Ⅲ,10000rpm離心30秒,棄廢液。
    (6)再加入500μl SR-Ⅲ,10000rpm離心30秒,棄廢液。
    (7)將吸附柱放回空收集管,13000rpm離心2min。
    (8)取出吸附柱,放入一個干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位加入70μl TU-3(使用前事先預熱至65-70℃,有助于提高洗脫效果),室溫放置3~5min,12000rpm離心1min,將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min。
    (9)洗脫液即為模板,可放在2~8℃,如果要長時間存放,可以放置在-20℃。
    3. PCR操作
    加樣體系:將下列試劑加入0.5mLPCR反應管中,最好在冰浴條件下加樣。
     

    反應條件:
    4.
    配制1%瓊脂糖凝膠,取PCR產物5uL混合1μl TU-7,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加3μl TU-8,在120v 電壓下,1×TAE液中電泳15分鐘,在紫外成像儀下觀察結果。


    【結果判定】    在845bp 位置出現擴增帶,實驗結果為陽性(如圖)。
                              
    1.DL2000 Marker
    2.標準陽性片段
    3.陰性對照
    【注意事項】
    1. 每次使用,開蓋之前請先瞬時離心,使試劑沉于管底。
    2. 本試劑盒為20頭份量試劑,操作失誤或移液器不準確造成最終劑量不夠情況,不予負責。
    3. 所有試劑在要求溫度下保存,-20℃保存試劑盡量減少反復凍融,使用后的試劑立即放回,避免在室溫擱置太久。
    4. 盡量建立PCR試驗操作區,避免交叉污染。
    5. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行,由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況,不予負責。
    6. 吸頭、離心管和PCR管在使用前,要高壓滅菌,操作過程盡量不要用手接觸到管內壁,可用鑷子夾取。
    7. 注意防止試劑污染,在有效期限前用完。
    【有效期】
    本制品有效期為1年,生產日期見包裝內側。
    【聯系人】 王金良、管宇               電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用     



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    編輯:熊方方




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